TROSY
TROSY (Transverse relaxation optimized spectroscopy) — метод двумерной (2D) спектроскопии ЯМР, применяемый при изучении белков, для увеличения чувствительности и спектрального разрешения. Этот метод позволяет изучать большие молекулы и молекулярные комплексы.
Применение ЯМР-спектроскопии для исследования больших молекул ограничено уширением спектральных линий, происходящем с ростом молекулярной массы. Большие молекулы имеют большие времена корреляции вращательного движения и, соответственно, короткие времена поперечной релаксации (Т2). Другими словами, сигналы ЯМР больших молекул спадают быстрее, что приводит к уширению линий и плохому разрешению.
Вследствие непрямого диполь-дипольного взаимодействия, в отсутствии декаплинга пики на HSQC спектрах появляются в виде мультиплетов. Принципиально разные компоненты мультиплетов имеют различную ширину. Это происходит из-за конструктивного или деструктивного взаимодействия различных механизмов релаксации. Обычно в спектрах больших белков в высоких магнитных полях эффект поперечной релаксации (Т2) преобладает над диполь-дипольным (ДД) механизмом релаксации и механизмом анизотропии химических сдвигов (АХС). Механизмы релаксации обычно взаимосвязаны, но вклад в общую скорость релаксации от каждого компонента имеет свой знак, поэтому порядок релаксации разных компонентов мультиплетов различается. Эксперимент TROSY[1] создан для того, чтобы выбрать компоненты, для которых различные механизмы релаксации почти удалены, в результате чего сигналы на спектре оказываются узкими. Это приводит к значительному повышению как спектрального разрешения, так и чувствительности, что крайне важно при изучении больших и сложных биомолекул.
Такой подход значительно расширяет диапазон молекулярных масс белков, которые могут быть изучены методом ЯМР, однако для достижения необходимого баланса между анизотропией химических сдвигов и диполь-дипольным механизмом релаксации, для проведения эксперименов TROSY, как правило, требуются высокие магнитные поля; диапазон анизотропии химических сдвигов меняется с напряженностью поля, в то время как константы диполь-дипольного взаимодействия от напряженности поля не зависят.
Литература[править | править код]
- ↑ K. Pervushin, R. Riek, G. Wider, and K. Wüthrich (1997) Attenuated T2 relaxation by mutual cancellation of dipole-dipole coupling and chemical shift anisotropy indicates an avenue to NMR structures of very large biological macromolecules in solution. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94 12366-71 doi:10.1073/pnas.94.23.12366 PMID 9356455